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DNA提取中实验试剂作用原理

核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来使得样本核酸提取工作自动完成的仪器。其在环境微生物检测、食品安全检测、输血安全、法医学鉴定、疾病控制中心、临床疾病诊断、生物学研究以及畜牧业等多种领域得到广泛地应用。下面就让小编带你了解一席DNA提取中实验试剂的作用以及原理。


1.溶液III--3mol/LNaAc(pH4.8)溶液:

NaAc的水溶液呈碱性,必须将大量的冰醋酸加入从而将pH调节至4.8。因此,实际上该溶液是NaAc-HAc的缓冲液。为了将pH12.6的抽提液的pH调回至中性,使用pH4.8的NaAc溶液,从而使变性的质粒DNA可以复性,并能稳定存在。而高盐的3mol/LNaAc对变性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀有利。前者是由于对核酸上的电荷的中和,使得相斥力减少而互相聚合,后者是由于钠盐与SDS-蛋白复合物作用后,可以使较小的钠盐形式复合物形成,从而更加完全的沉淀。


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2.溶液II-NaOH-SDS液:

SDS:SDS是离子型表面活性剂。它的主要功能如下:

(1)SDS能与蛋白质结合使得R-O-SO3-…R+-蛋白质的复合物形成,使蛋白质变性而沉淀下来。然而SDS会对核糖核酸酶起到抑制的作用,因此,在之后的提取过程中,为了避免在下一步操作中(用RNase去除RNA时)受到干扰,必须先将其去除干净。

(2)对细胞膜上的脂质与蛋白进行溶解,通过膜蛋白的膜蛋白从而使细胞膜被破坏。

(3)将细胞中的核蛋白解聚。


NaOH:当溶液pH<9,>5时,核酸是稳定的。然而当溶液pH<3,>12时,就会导致双链之间氢键的解离而变性。在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1/L,将抽提液加入时,该系统的pH就高达12.6,所以促使了质粒DNA与染色体DNA的变性。


3.溶液I—溶菌液:

EDTA:(1)因为溶菌酶的反应需要有较低的离子强度的环境,所以EDTA的存在对溶菌酶的作用有利。

(2)对Mg2+、Ca2+等金属离子螯合,使脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅基)得到抑制。


葡萄糖:对溶液的粘度进行增加,使渗透压维持,使DNA受机械剪切力作用而降解得以避免。


溶菌酶:其为糖苷水解酶,其可以将肽聚糖中的β-1,4糖苷键(细胞壁的主要化学成分)水解,所以其具有溶菌的作用。当溶液中pH<8时,会抑制溶菌酶的作用。


2019-08-13 17:26:43 浏览次数:193次